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◇ 统计源期刊
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◇ CSCD-C
文章类型：
单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
外科学系
骨科
出处：
ISSN：
关键词：
肾ACHN细胞
RNA干扰
细胞周期蛋白D1
增殖
摘要：
目的证实Cyclin D1基因作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性及发卡环RNA（shRNA）表达载体介导该基因沉默的有效性。方法设计合成Cyclin D1-shRNA模板片段,与Pgenesil-1-U6载体连接,构建shRNA真核表达载体;将Pgenesil-Cyclin D1-shRNA转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western blot分析Cyclin D1基因mRNA及蛋白表达;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞凋亡率;Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭。结果Pgene-sil-Cyclin D1-shRNA构建成功。Cyclin D1-shRNA实验组Cyclin D1mRNA抑制效果显著（0.10±0.04）,明显高于Pgenesil-NC阴性对照组（0.92±0.03）及ACHN空白对照组（0.94±0.04）（均P(0.05）。同样,实验组Cyclin D1蛋白表达明显下调。流式细胞术分析提示,Cyclin D1-shRNA组细胞早期及晚期凋亡细胞均较Pgenesil-NC组和ACHN组显著增高。生长曲线显示Cyclin D1-shRNA组细胞生长明显缓慢（P(0.05）。Transwell实验同样发现该组细胞侵袭能力显著下降（P(0.05）。结论Cyclin D1可作为肾癌ACHN细胞生物学行为的评判标准。经载体介导shRNA干扰的高效性为肾癌基因治疗提供了实验依据。
基金：
国家重点基础研究发展计划资助项目(2002CB513107)
第一作者：
第一作者单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王江,郭风劲,陈安民,等.Cyclin D1基因沉默诱发肾癌ACHN细胞增殖受抑的研究[J].华中科技大学学报(医学版).2010,39(02):141-146.
