目的:建立测定患者氟尿嘧啶（5-Fu）血药浓度的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法,验证后应用于临床5-Fu血药浓度测定。方法:使用Agela Innoval NH2色谱柱（2.1 mm×50 mm,5μm）,使用甲醇-超纯水（2∶98）为流动相等度洗脱,流速为0.3 ml·min-1,柱温为40℃。5-Fu和内标5-溴尿嘧啶在负离子电喷雾电离模式下的定量离子对分别为m/z 128.8→42.1和m/z188.6→42.1（内标5-溴尿嘧啶）。根据"生物样品定量分析方法验证指导原则（中国药典2015年版四部）"对该方法进行验证。结果:5-Fu浓度在101 000 ng·ml-1范围内线性良好,定量下限为10 ng·ml-1。在线性范围内精密度、准确度、基质效应、稳定性均符合生物样品分析的要求。结论:本研究建立的患者5-Fu血药浓度检测方法操作简便、快速、准确、重复性好,可用于5-Fu的血药浓度监测。