目的：建立液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）测定人血浆中英夫利昔单抗血药浓度的方法。方法：采用甲醇沉淀提取血浆中的英夫利昔单抗，经变性、还原、烷基化后，加入胰酶裂解成大量肽段，通过分析特征性肽段进行测定，选用贝伐珠单抗特征肽段作为内标。色谱柱为Ultimate LP C18（5 μm， 21 mm×100 mm），以含0.1%甲酸的水和含0.1%甲酸的乙腈为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子扫描。对所建立LC-MS/MS方法进行方法学验证并利用该方法测定患者的血浆药物浓度。结果：英夫利昔单抗在1～100 μg·mL-1范围内线性关系良好，批内和批间准确度在85.0%～115.0%之间，批内和批间精密度%CV均小于15%，特异性、基质效应、稳定性、选择性、残留均符合指导原则要求。10例炎症性肠病患者体内英夫利昔单抗血药浓度在3.61～19.60 μg·mL-1范围内。结论：该研究建立的LC-MS/MS方法可以准确、精密测定英夫利昔单抗血药浓度，可为临床监测英夫利昔单抗提供有效的检测手段。