目的:建立测定人血浆中替考拉宁浓度的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）测定方法。方法:选用Welch Ultimate XB-C18（2.1 mm×50 mm, 5.0μm）色谱柱，以达托霉素为内标，以含0.1%甲酸的水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱，柱温为40℃。利用乙腈进行沉淀蛋白样品前处理，采用电喷雾离子化多反应监测正离子模式，测定替考拉宁A2-1、A2-2、A2-3、A2-4和A2-5 5种主要成分的总浓度。结果:替考拉宁的总浓度线性范围为1～60μg·mL-1,定量下限为1μg·mL-1,日内和日间精密度RSD均小于15%,提取回收率80.04%～96.02%,内标归一化基质效应为90.12%～104.04%。研究测定了16例给予替考拉宁后患者的血药谷浓度，浓度范围从定量下限至31.2μg·mL-1,达标率56.25%,患者个体差异大且初始达标率低。结论:该研究建立了一种快速、简便、稳定的LC-MS/MS测定人血浆中替考拉宁血药浓度的方法，具有较高准确度、精密度和回收率，为临床给药方案的优化奠定基础。