资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心
华中科技大学同济医学院附属同济医院
分子医学中心
科研平台
[2]华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
肿瘤科
出处：
ISSN：
关键词：
磷脂酰肌醇3-激酶
p55PIK
基因表达
克隆细胞
摘要：
目的构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,在人胚胎肾细胞株HEK293中筛选其稳定表达的细胞株。方法 PCR扩增p55PIK基因全长,经过Xho1和Xma1酶切、T4DNA连接酶连接、DH5α转化,酶切和测序鉴定以确定构建质粒正确。转染人胚胎肾细胞株HEK293,G418筛选稳定表达p55PIK的单克隆细胞株,应用Western blot方法检测p55PIK蛋白的表达。结果 pEGFP-N1-p55PIK质粒经PCR、酶切、测序鉴定正确,经过G418筛选后获得稳定细胞株,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白在HEK293细胞中的表达,Western blot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-p55PIK的细胞中p55PIK表达水平增高。结论正确构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,并在HEK293细胞中成功筛选出稳定表达p55PIK的细胞株,为进一步探讨p55PIK的功能提供了良好的工具。
基金：
国家重点基础研究发展规划项目(2009CB521802)%国家自然科学基金(30872472;30800569)%湖北省自然科学基金(2008CDB174)
第一作者：
第一作者单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心
推荐引用方式(GB/T 7714)：
左学良,王桂华,蔡娟,等.磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p55PIK表达载体的构建及单克隆株的筛选[J].华中科技大学学报(医学版).2010,39(03):366-368.
