目的构建携带骨桥蛋白双链小干扰RNA（OPN-siRNA）的质粒表达载体,筛选出基因沉默效果最明显的短发卡样RNA（shRNA）质粒表达载体。方法设计并合成2个针对OPN的shRNA寡核苷酸片段（shRNA1,shRNA2）,退火形成双链并分别克隆进入载体pGenesil-1。酶切鉴定后,采用LipofectamineTM 2000介导的转染方法将重组的shRNA质粒转入大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）,筛选出稳定转染株。采用RT-PCR及Western免疫印迹检测其对OPN表达的抑制效果。结果 shRNA质粒成功转染入VSMC且效率达50%以上。转染含OPN shRNA1的VSMC的OPN mRNA和蛋白的表达分别为0.16±0.04和0.30±0.09,含OPN shRNA2分别为0.23±0.06和0.44±0.06,两组之间及分别与正常细胞组比较差异均有统计学意义（P(0.01）。空载体组和阴性对照组与正常细胞组比较,差异均无统计学意义（P)0.05）。结论成功构建了靶向OPN基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为shRNA1质粒。