目的建立稳定的新生小鼠耳蜗血管纹边缘细胞的体外培养体系,为研究边缘细胞的形态和功能提供良好的条件和模型。方法用机械分离和化学消化结合的方法制成细胞悬液,将其接种于3.5 cm培养皿中贴壁生长,加入含有10%胎牛血清、氢化可的松、表皮生长因子、三碘甲状腺原氨酸、胰岛素、转铁蛋白等促进生长成分的完全培养液,于37℃、5%CO2/95%空气的恒温培养箱内培养,每日观察细胞生长状况,每周换液2次。使用细胞角蛋白18通过免疫细胞化学技术鉴定细胞的中间丝类型。制作透射电镜标本观察细胞的超微结构。结果光镜下,培养24 h至第4天可见培养皿内细胞贴壁,未见明显增长。第5天,多角形细胞开始增多。第7天,在成片的梭形细胞区域内,多角形细胞呈单层极性排列,形成细胞岛,呈典型的"铺路石"样外观。第10天,可见"dome"形成。第14天后,两种细胞混杂生长,部分多角形细胞胞体增大,胞质内空泡增多,呈"泡沫样"外观。细胞最长生长21 d。免疫细胞化学染色显示多角形细胞表达细胞角蛋白18。透射电镜下见多角形细胞为1个或2个卵圆形核,有丰富的细胞器并有分泌小泡,可见微绒毛等上皮细胞特征。结论采用机械分离和化学消化结合的边缘细胞培养方法,成功建立了小鼠血管纹边缘细胞的体外培养模型,经过免疫细胞化学鉴定证实,这一培养体系是稳定、可靠的。