摘要：
目的 探讨大鼠原代皮质神经元无血清培养的影响因素及优化培养方法.方法 采用原代神经元无血清培养,按胎鼠、24 h新牛鼠、5 d新生鼠及不同取材环境温度(20℃、30℃)下胰蛋白酶消化0 rain、5 rain、15 rain进行分组.应用锥虫蓝拒染法检测接种时神经元存活率,神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织细胞化学染色法检测各组所得神经元纯度,倒置显微镜动态观察各组神经元形态变化.结果 胎鼠组和24 h新生鼠组原代神经元状态良好,2组细胞纯度[(91.30 4-1.03)%、(89.50±1.78)%]和存.活率[(98.20 4-0.58)%、(97.10±0.98)%]比较差异均无统计学意义;5 d新牛鼠组神经元纯度为(82.00 4-1.25)%,存活率为(92.87±1.56)%,均低于胎鼠和24 h新生鼠组(P.<O.05).缩短取材操作时间,结合环境温度适当调整消化时间可提高神经元细胞纯度和细胞活性:环境温度20℃,消化15 rain,30℃消化5 rain,细胞存活率最高,分别为(98.20±0.58)%、(96.70±0.64)%.结论 24 h新生鼠原代神经元无血清培养操作性强、省时,优化神经无培养过程影响因素(温度、消化时间等)可提高神经元细胞的纯度和存活率.
