目的 探讨原代大鼠肝细胞分离及培养的简易方法,并对其纯度及生物活性进行鉴定.方法 采用改良原位两步非循环灌流法及多次过滤低速离心法分离原代大鼠肝细胞,常规DMEM高糖培养基培养原代大鼠肝细胞,锥虫蓝拒染法检测接种时肝细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝细胞形态变化.过碘酸-Schiff反应检测肝细胞糖原合成能力,并利用免疫细胞化学方法检测肝细胞角蛋白18(CK-18)的表达联合判断肝细胞纯度.结果 每只大鼠可获取(1.38～1.74)×108个肝细胞,接种瞬时肝细胞活性＞90％.倒置显微镜下观察肝细胞在接种后4h基本完成贴壁,贴壁的细胞胞体变大变平,随后细胞相互靠拢呈岛状或条索状连接.糖原染色发现肝细胞内糖原被染成红色颗粒或片状.抗CK-18免疫细胞化学染色发现CK-18在肝细胞内均匀分布,被染成棕黄色.糖原染色及细胞CK-18联合鉴定肝细胞纯度达95％以上.结论 用改良原位两步非循环灌注法及多次过滤低速离心法成功分离并培养原代大鼠肝细胞,可操作性强,所培养肝细胞数量、活力和纯度高,可在具备基本细胞培养条件的实验室推广.