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小鼠BTLA胞外段腺相关病毒载体的构建和表达

Construction and Expression of Adeno-associated Virus Vector of Mouse Soluble BTLA

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资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-C

单位: [1] 同济大学附属第一妇婴保健院 [2] 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
出处:
ISSN:

关键词: B/T淋巴细胞弱化因子 腺相关病毒 基因克隆 真核表达

摘要:
目的构建小鼠B/T淋巴细胞弱化因子(BTLA)胞外段的腺相关病毒载体,并感染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO)进行真核表达。方法从C57BL/6小鼠脾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增BTLA胞外段,然后将其克隆到腺相关病毒载体的骨架质粒中,构建重组骨架质粒psBTLA。重组质粒经双酶切鉴定及测序正确后,与pHELP质粒以及pRC质粒3质粒共转染293T细胞,收获含病毒的上清后用氯仿-PEG8000的方法进行纯化浓缩,再用浓缩后的病毒液感染CHO细胞,并用SDS-PAGE和Western blot检测BTLA胞外段的表达。结果获得长度为502 bp的小鼠BT-LA胞外段基因,经测序证实其序列正确。含有BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体感染CHO细胞后,SDS-PAGE和Western blot分析证实感染的CHO细胞可表达出约21 kD的BTLA胞外段蛋白。结论成功构建小鼠BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体,并感染CHO细胞后表达出相应蛋白,为进一步研究BTLA胞外段的功能效应奠定实验基础。

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第一作者:
第一作者单位: [1] 同济大学附属第一妇婴保健院
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