资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室
华中科技大学同济医学院附属同济医院
临床免疫研究室
[2] 湖北省妇幼保健院检验科
出处：
ISSN：
关键词：
细胞液泡蛋白质分选因子4B
重叠延伸PCR
定点突变
真核表达载体
摘要：
目的构建含液泡蛋白质分选因子4B（VPS4B）基因定点突变的真核表达载体。方法用RT-PCR法从HuH-7细胞中扩增VPS4B基因,并克隆到真核载体pXF3H上。采用重叠延伸PCR定点突变技术,构建K180Q和E235Q两种突变质粒,经DNA测序确证定点突变的结果,再将VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞,western blot检测融合蛋白表达。结果克隆了VPS4基因,构建了真核载体pXF3H-VPS4B,经重叠延伸PCR得到突变体。DNA测序结果显示,编码180位氨基酸的538～540位碱基由AAG突变为CAG;编码235位氨基酸的703～705位碱基由GAA突变为CAA,其他碱基均无突变。VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞可检出HA-VPS4B融合蛋白表达。结论成功构建了VPS4以及K180Q和E235Q两种突变的真核表达载体。
基金：
国家"十一五"传染病防治重大专项资助项目(2008ZX10003-011)
第一作者：
第一作者单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室
[2] 湖北省妇幼保健院检验科
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王维鹏,夏剑波,李磊,等.重叠延伸PCR法构建VPS4B基因定点突变真核表达载体[J].临床检验杂志.2011,29(01):57-59.
