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收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
单位：
[1]同济大学附属同济医院肾内科,上海,200065
[2]第二军医大学长征医院肾内科,上海,200003
[3]同济大学附属同济医院肾内科,上海 200065
[4]江西省九江市中医医院肾六科,九江 332000
[5]同济大学附属同济医院中心实验室,上海,200065
出处：
ISSN：
关键词：
动力蛋白激活蛋白1
真核表达载体
足细胞
摘要：
目的 构建野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)真核表达载体,并观察其在小鼠足细胞中表达.方法 以总RNA反转录合成的cDNA为模板,通过PCR扩增得到小鼠dynactin-1的全长cDNA,将该片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)-FLAG和pEGFP-N1；利用部位特异性突变插入方法构建突变型表达载体,经酶切和测序鉴定；各载体转染小鼠足细胞MPC5后,用蛋白质印迹分析法和免疫荧光显微镜法检测dynactin-1蛋白表达.结果 PCR扩增得到大小为3.8 kb的小鼠dynactin-1片段,连接到载体后,酶切鉴定电泳结果分别显示pcDNA3.1(+)-FLAG(5.4 kb)、pEGFP-N1(4.7 kb)以及小鼠dynactin-1(3.8 kb)片段,测序分析结果显示克隆的野生型和突变型小鼠dynactin-1序列与数据库序列相同；蛋白质印迹分析法检测到重组dynactin-1的蛋白条带；免疫荧光显微镜观察到dynactin-1主要表达在小鼠足细胞的细胞质.结论 成功构建了野生型和突变型小鼠dynactin-1真核表达载体,并在足细胞中表达,为进一步开展细胞生物学研究奠定了实验基础.
基金：
上海市自然科学基金(09ZR1434800)
第一作者：
第一作者单位：
[1]同济大学附属同济医院肾内科,上海,200065
[3]同济大学附属同济医院肾内科,上海 200065
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王春花,李林,傅鹏,等.野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1真核表达载体的构建及其在小鼠足细胞中的表达[J].第二军医大学学报.2012,33(7):780-784.
