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◇ 统计源期刊
文章类型：
单位：
[1]南京医科大学第一附属医院心脏内科,南京,210029
江苏省人民医院
[2]同济大学附属同济医院心身科,上海,200065
[3]上海大学生命科学学院,上海,200444
出处：
ISSN：
关键词：
FNDC5基因
真核表达载体
质粒构建
线粒体
能量
小鼠
摘要：
目的 构建含小鼠FNDC5基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-FNDC5,并初步探索其对C2C12肌细胞的线粒体能量代谢的影响.方法 应用反转录-聚合酶链反应法从小鼠腓肠肌和心脏组织中扩增出两端带有HindⅢ和EcoR Ⅰ酶切位点的FNDC5编码片段,经回收、纯化酶切后,依次连接到质粒PMD19-T和pEGFP-C3上,获得过表达载体后转染至C2C12肌细胞,48 h后以激光共聚焦显微镜拍摄线粒体荧光强度,以荧光定量PCR检测与线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达情况.结果 PCR及测序结果表明:重组质粒pEGFP-C3含有FNDC5段,方向及大小正确,过表达FNDC5可以增强线粒体荧光强度,并增加线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达.结论 成功构建了小鼠真核表达载体pEGFP-C3-FNDC5,过表达FNDC5可以增强线粒体能量代谢.
第一作者：
第一作者单位：
[1]南京医科大学第一附属医院心脏内科,南京,210029
推荐引用方式(GB/T 7714)：
魏飞宇,成燕,李进,等.含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5真核表达载体的构建及初步功能研究[J].同济大学学报（医学版）.2015,36(4):19-24,37.
