目的构建人表面活性物质蛋白-B（SP-B）基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒,并分析其在H441细胞中的转录活性。方法 （1）以人基因组DNA为模板,PCR扩增SP-B启动子（-218/+435 bp）序列片段,并通过TA克隆方法连接到pGM-T载体上,筛选阳性克隆将目的片段进行测序。测序鉴定正确后的目的片段被克隆到荧光素酶表达载体pGL3-Basic上构建pGL3-basic-SP-Bpromoter重组质粒,酶切及测序鉴定重组质粒;（2）将构建的pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒酶切改造,SP-B启动子克隆进pGL4.17载体构建pGL4.17-SP-B-promoter重组质粒;经酶切及基因测序确认无误后,采用脂质体法将构建的两种重组质粒分别和内参质粒pRL-TK同时转染H441细胞,检测双荧光素酶活性。结果构建的重组质粒经酶切及测序鉴定完全正确,转染H441细胞后,检测细胞裂解液萤火虫荧光素酶（firefly）及海肾荧光素酶（renilla）活性,两者比值间接反映启动子活性,pGL3-basic/pGL4.17-SP-B-promoter重组质粒的firefly/renilla比值（2.8±1.1、66.5±3.8）较空载体质粒pGL3-basic、pGIA.17（0.2±0.1,4.3±0.4）均明显升高（t=4.182,27.419,P=0.000）。pGIA.17重组质粒firefly/renilla比值明显高于pGL3-basic重组质粒,其差异有统计学意义（t=27.712,P=0.000）。结论成功构建具有SP-B基因转录活性的pGL3-basic/pGL4.17-SP-B-promoter重组质粒,pG14.17重组质粒荧光素酶活性高,为后续研究SP-B基因转录调控奠定了理论基础。