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文章类型：
单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
外科学系
肝脏外科
出处：
ISSN：
关键词：
可诱导性基因敲减RNA
启动激活
性别决定区Y框蛋白2
摘要：
目的构建"all-in-one"可诱导敲减质粒,为慢病毒敲减质粒实验提供一个切实可行的构建质粒的方法。方法使用特异性限制性核酸内切酶对可诱导性PLKO—Tet—On载体质粒进行剪切,与使用软件设计好的具有黏性末端的短发夹结构RNA的核酸序列进行拼接。拼接后的质粒经过大肠杆菌转化扩增后进行慢病毒包装。获得的病毒对特定细胞进行特定基因的敲减。利用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT—qPCR）及Western blot等方法对敲减效果进行评估,从而获得敲减效果最好的克隆。结果构建的3组质粒经测序结果表明干扰序列准确插入。以小鼠乳腺癌细胞4T1的性别决定区Y框蛋白2（SOX2）基因敲减效果为例,转染细胞经多氧西林诱导后3组基因在mRNA水平上的敲减效果分别为（83.50±7.10）%、（62.30±10.20）%、（77.40±4.57）%;当多氧西林为100μg/L时,3组干扰RNA在SOX2蛋白水平上敲效果满意。结论建立药物可诱导性敲减特定基因的短发夹敲减质粒是一种切实可行并且更加严谨的实验方法 。
基金：
卫生部临床重点学科建设项目([2010]493-51)%湖北省肝脏外科医学临床研究中心(2012DCA13003、2014BKB089、2013BCB026)
基金编号：
[2010]493-51
第一作者：
第一作者单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
张占国,陈伟勋,梁慧芳,等.可诱导性“all-in-one”短发夹结构RNA基因敲减质粒系统构建[J].中华实验外科杂志.2014,31(12):2723-2725.
