摘要:
目的构建p110β基因高表达质粒,转染胃癌MKN28细胞,观察其对胃癌MKN28细胞增殖的影响。方法以基因组cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,构建pCMV-Flagp110β质粒,通过酶切鉴定及测序确定无误后,转染MKN28细胞,通过实时定量PCR(Real-time PCR)和Western blot检测p110β高表达,以及通过噻唑蓝(MTT)法检测其对MKN28细胞增殖的影响。结果成功构建了Flag-p110β质粒,在胃癌MKN28细胞中高表达p110β能促进蛋白激酶B(AKT)的磷酸化,48 h后噻唑蓝(MTT)法检测空白组、阴性对照组和高表达p110PIK组490 nm波长处的吸光度值分别为:0.791 6±0.0425、0.828 1±0.0156、1.031 2±0.1094,差异有统计学意义(P(0.05)。结论成功构建Flag-p110β质粒,高表达p110β能够促进MKN28细胞增殖。