摘要:
目的构建DAB2IP高表达的结直肠癌HT29稳定细胞系,检测其对HT29细胞侵袭及迁移能力的影响。方法将携带DAB2IP基因序列的pcDNA3.1质粒转染HT29细胞,24 h后加入适量浓度的G418筛选(10μg/mL),两周后,通过实时定量PCR(qPCR)和Western blot方法检测DAB2IP mRNA水平和蛋白水平,验证DAB2IP的高表达;进一步,通过Transwell及划痕实验检测DAB2IP对HT29细胞侵袭及迁移能力的影响;最后,通过Western blot方法检测其对E-cadherin和vimentin蛋白的表达,初步探讨DAB2IP影响HT29细胞侵袭迁移能力的机制。结果经G418筛选后,DAB2IP的mRNA和蛋白水平均较对照组明显升高;高表达DAB2IP能够明显抑制HT29细胞的侵袭及迁移能力,差异具有统计学意义(P(0.001);高表达DAB2IP能够促进HT29细胞E-cadherin蛋白的表达,抑制vimentin蛋白的表达。结论成功筛选出DAB2IP高表达的HT29稳定细胞系,高表达DAB2IP能够通过抑制细胞上皮间质转化过程从而抑制HT29细胞侵袭及迁移能力。