摘要：
目的 从活性氧簇(ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)抗移植肺缺血再灌注损伤的作用机制.方法 健康雄性SD大鼠50只,随机分为对照组、移植组和MFG-E8组,袖套改良法建立大鼠左肺移植模型.MFG-E8组受体鼠术前30min经尾静脉注射rhMFG-E8 20 μg/kg,对照组和移植组受体大鼠尾静脉注射同等量生理盐水.肺移植再灌注2 h后阻断右肺门5min,全自动血气分析检测仪检测动脉血中氧分压(Pa02)和二氧化碳分压(PaCO2).苏木精-伊红(HE)染色观察移植肺组织显微病理改变,原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测移植肺组织细胞凋亡指数.组织活性氧检测试剂盒(DHE)检测肺组织中ROS水平,干/湿法测量肺湿质量/干质量(W/D)比.蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)、和凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)蛋白表达水平.酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)表达水平.组间比较使用 t检验,多组比较采取单因素方差分析.结果 再灌注2h后,HE染色可见移植组肺组织明显炎性细胞浸润、肺泡结构破坏、肺水肿、肺泡腔内渗出明显伴有一些红细胞;MFG-E8组肺组织炎性细胞浸润明显减少,未见明显肺水肿,肺泡结构基本完整.再灌注2h后,MFG-E8组动脉Pa02/Fi02显著高于移植组[(314.35±58.13)mmHg 比(212.76± 42.19)mmHg,t=4.473,P＜0.05];MFG-E8组肺组织ROS水平、细胞凋亡指数和W/D值均明显低于移植组[102.37±20.78 比 145.72±29.34、(20.36±5.37)％比(28.13±4.64)％、6.15±1.23比 8.51±1.83,t=3.813、3.462、3.385,P＜0.05].移植组大鼠肺组织 NLRP3、Caspase-1 和 ASC 蛋白水平表达明显高于对照组(0.42±0.18比0.20±0.11、0.28±0.12比0.12±0.10、0.65±0.15比0.40±0.13,t=3.298、3.239、3.983,P＜0.05);MFG-E8 组大鼠肺组织 NLRP3、Caspase-1 和 ASC 蛋白水平表达显著低于移植组(0.25±0.12 比 0.42±0.18、0.15±0.10)比(0.28±0.12、0.44±0.10比0.65±0.15,t=2.485、2.632、3.684,P＜0.05).移植组大鼠肺泡灌洗液中IL-Iβ和IL-18蛋白水平表达明显高于对照组[(105.74±34.73)pg/ml 比(70.8±7.25)pg/ml、(128.56±23.82)pg/ml比(93.48±14.53)pg/ml,t=3.114、3.975,P＜0.05];MFG-E8组大鼠肺泡灌洗液中 IL-1β 和 IL-18蛋白水平表达显著低于移植组[(80.16±8.35)pg/ml比(105.74±34.73)pg/ml、(95.50± 13.18)pg/ml 比(128.56±23.82)pg/ml,t=2.265、3.840,P＜0.05].结论 MFG-E8 可能通过下调ROS/NLRP3信号通路,抑制NLRP3炎症小体活化,减轻氧化应激和免疫炎性反应,发挥抗移植肺缺血再灌注损伤作用.
