摘要：
目的 研究蛋白激酶D-1(PKD-1)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达以及PKD-1信号调控NEN细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制,探讨其与NEN转移的相关性.方法 通过免疫荧光染色和免疫组织化学染色的方法,检测人胰腺NEN组织中PKD-1以及波形蛋白(Vimentin)、白细胞共同抗原(CD45)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及分布,分析转移性肿瘤细胞中PKD-1的表达;通过体外培养BON细胞,分别激活和阻断PKD-1信号,或以表皮生长因子(EGF)处理细胞,以免疫荧光染色、蛋白质印迹法(Western blot)和反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法,检测BON细胞中EMT相关标志物的表达,分析PKD-1信号对BON细胞EMT的调控机制.两样本间比较采用t检验,多样本间比较采用单因素方差分析(ANOVA).结果 NEN组织中Vimentin+转移性肿瘤细胞有在小动脉周围聚集现象,且PKD-1在NEN肿瘤细胞转移过程中呈动态变化;PKD-1信号能够促进BON细胞Vimentin的表达[(56.67±1.93)％比(35.55±2.22)％,t=7.178,P＜0.01]并升高PKD-1和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平,EGF能刺激BON细胞发生间质样形态变化,并降低E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达(0.517±0.005比1.000±0.004,t=74.63,P＜0.001)而增加 Vimentin 的表达(9.632±0.646 比 1.004±0.061,t=13.29,P＜0.001).结论 NEN中PKD-1信号是调控肿瘤细胞EMT的重要机制;血管内皮细胞分泌EGF可能通过PKD-1信号诱导肿瘤细胞EMT,促进肿瘤转移.
