摘要：
目的 探讨非瑟酮(Fisetin)对阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)衰老的影响及其相关机制.方法 使用不同浓度的DOX(0.1、0.25、0.5、1μmol/L)诱导HPAEC衰老,通过CCK8法检测细胞增殖活性,Western blot法检测衰老相关蛋白P53、P21表达.随后用不同浓度的Fisetin作用于HPAEC,分别于0、24、48和72 h检测Fisetin对HPAEC细胞增殖的影响,流式细胞术检测Fisetin对细胞周期的影响,利用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)对衰老细胞进行染色并计数,活性氧(ROS)试剂盒检测Fisetin对HPAEC活性氧(ROS)产生的影响,West-ern blot法检测衰老相关蛋白、Nrf2和MAPK信号蛋白的表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分泌的细胞因子浓度,CCK8法检测Fisetin预处理的HPAEC培养上清对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖的影响.结果 当Fisetin浓度在20μmol/L以下时,HPAEC增殖活性在24、48、72 h没有明显降低,差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术检测发现DOX刺激后,90％ 以上的HPAEC被阻滞在DNA合成前期(G0/G1期),而Fisetin(5、10、20μmol/L)处理组细胞周期在DNA合成期(S期)分别占40％、50％ 及55％,呈浓度依赖性上升,差异具有统计学意义(P<0.01).Western blot证实DOX刺激后,HPAEC中衰老相关蛋白P21表达增加,而随着Fisetin作用浓度的增加,P21表达逐渐下降(P<0.05).SA-β-gal衰老染色和ROS染色证实DOX干预后,衰老细胞的数量明显增加,ROS的产生量也增加;而Fisetin处理后,衰老细胞的数量逐渐减少,ROS的产生量也减少.Fisetin可增加HO-1、p-P38的表达,促进Nrf2核转移,沉默HO-1和抑制p-P38表达均可减弱Fisetin对P21的抑制作用.DOX刺激后细胞衰老相关分泌表型(SASP)的细胞因子表达不断升高,而不同浓度的Fisetin(5、10、20μmol/L)干预后,SASP细胞因子的表达量下降.CCK8实验证实,Fisetin预处理的HPAEC培养上清对HPASMC增殖有抑制作用.结论 Fisetin可通过Nrf2/HO-1和MAPK信号通路抑制DOX诱导的HPAEC衰老,并能够抑制HPASMC增殖,从而抑制肺动脉重塑.
