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烟草烟雾提取物刺激人肺动脉内皮细胞引起衰老并诱导平滑肌细胞增殖和迁移

The stimulation of human pulmonary artery endothelial cells by cigarette smoke extract contributed to cell senescence and induced human pulmonary artery smooth cell migration

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资源类型:
Pubmed体系:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-C ◇ 中华系列

单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所 华中科技大学同济医学院病理学系
出处:
ISSN:

关键词: 吸烟 肺动脉内皮细胞 肌细胞 平滑肌

摘要:
目的观察烟草烟雾提取物(CSE)对肺动脉内皮细胞(HPAEC)衰老的影响以及细胞衰老相关分泌表型(SASP)对肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)的增殖和迁移效应。方法对HPAEC给予不同浓度的CSE,分别于0、6、12、24、48和72 h观察并使用CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞的增殖情况,利用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)衰老染色对衰老细胞进行拍照染色计数,Western blot法检测衰老相关蛋白的表达情况,免疫荧光检测细胞中蛋白的表达量,实时PCR检测衰老相关基因的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分泌的细胞因子浓度,Transwell检测HPASMC的迁移情况。结果与0 h时比较,48 h时细胞活性明显降低,吸光度值为(1.8±0.1),差异有统计学意义(P(0.05);72 h时细胞活性(1.8±0.1)下降更加明显(P(0.01)。流式细胞术检测细胞周期发现CSE刺激后S期细胞(14.1±1.2)数量较前(28.5±1.8)明显下降,细胞周期阻滞较为明显且具有统计学意义(P(0.01)。细胞衰老相关分泌表型(SASP)的含量不断升高,其中MCP-1含量0 h时为(177±39),48 h时为(460±43),72 h时为(609±64);TGF-β1含量0 h时为(121±18),48 h时为(413±32),72 h时为(606±67);bFGF含量0 h时为(123±17),48 h时为(291±13),72 h时为(471±43),差异均有统计学意义(均P(0.05)。Western blot法可见HPAEC中衰老相关蛋白p53或p21随着CSE刺激浓度和刺激时间的增加表达也逐渐增高(P(0.05),SA-β-gal衰老染色可见随着时间延长视野内衰老细胞的数量明显增加。免疫荧光和Transwell小室实验图像均可验证细胞增殖情况。结论 CSE可诱导HPAEC发生衰老并能够使平滑肌细胞发生迁移。

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第一作者:
第一作者单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所 华中科技大学同济医学院病理学系
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