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LRIG1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定

Construction and identification of lentiviral vector over-expressing leucine-rich repeats and immunogiobulin bulin-like domain protein 1 gene

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收录情况: ◇ 统计源期刊

单位: [1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科 [2] 浙江大学医学院附属第二医院神经外科
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关键词: 人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 慢病毒 基因转染 构建 鉴定

摘要:
目的探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助。方法用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-XHT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot检测LRIG1 m RNA和蛋白表达。结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 m RNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功。结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达。

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第一作者:
第一作者单位: [1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科
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