摘要：
目的:研究一种简便实用的大鼠Kupffer细胞(KCs)的分离与鉴定方法。方法:原位两步灌流法对大鼠肝脏进行冲洗消化;利用Percoll液进行不连续密度梯度离心分离KCs;选择性贴壁纯化KCs;台盼蓝染色法鉴定细胞存活率;吞噬实验鉴定细胞功能;ED1单克隆抗体免疫荧光细胞化学鉴定KCs;显微镜下观察KCs形态变化。结果:获取的KCs数量为(2.41±0.32)×107/只,其中活细胞数量占(92.3±2.12)%;吞噬实验显示(95.2±2.58)%的细胞内存在碳素颗粒;免疫荧光化学检测证明KCs纯度为(96.3±1.46)%;在显微镜下观察KCs形态,36h细胞形态变得不规则,3d后呈星形或多角形,体外培养可以存活7~10d。结论:此种KCs分离方法操作相对简便,获取的细胞数量、活性功能、纯度等方面均能达到进一步的实验要求,值得推广。
