目的建立一种新生小鼠肝脏库普弗(Kupffer)细胞分离的简便方法,为胆道闭锁发病机制的研究提供实验细胞。方法取6~8个新生小鼠肝脏置于200目研磨网上研磨后,将研磨液种值于无菌细胞培养瓶A中。培养3~4 d后将贴壁细胞再次悬浮并种植于另一无菌培养瓶B中,将培养瓶B置于细胞培养箱培养45 min后1×磷酸盐缓冲液(PBS)洗细胞,获得二次贴壁细胞。二次贴壁细胞与2μm荧光小球共培养1 h后,1×PBS清洗细胞,处理完后置于激光共聚焦显微镜下观察。结果巨噬细胞标志物F4/80免疫荧光法检测二次贴壁细胞,阳性率)99%,活性99%,细胞获得10×10~7/L。二次贴壁细胞与2μm荧光小球共培养,可见胞质中含有大量荧光小球。结论"二次贴壁法"选择性贴壁从新生小鼠肝脏获取Kuppfer细胞,取材容易,操作方便,不需特殊设备,可满足新生小鼠胆道闭锁发病机制研究的需求,实验价值高。