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◇ 统计源期刊
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◇ CSCD-C
文章类型：
单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
外科学系
骨科
[2] 新疆石河子大学医学院附属医院骨科
出处：
ISSN：
关键词：
siRNA
RNA干扰
慢病毒载体
软骨细胞
增殖
摘要：
目的构建筛选出靶向特异uPA-siRNA慢病毒表达载体,感染软骨细胞后观察其对软骨细胞增殖及代谢的影响。方法根据siRNA原理设计、构建4对靶向兔uPA siRNA序列（P1、P2、P3和P4）,用RT-PCR筛选出高效靶向的P2序列。各序列经慢病毒包装后,通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞后,用RT-PCR和Western blot法分别检测uPA-siRNA对细胞内uPA mRNA和蛋白表达水平的抑制效果,用CCK-8法检测uPA-siRNA对软骨细胞增殖的影响。结果成功构建4对uPA-siRNA序列并筛选出用于后续实验的高效靶向P2序列,各序列经慢病毒载体包装并成功转染到原代软骨细胞中,在感染复数（MOI）为100时感染率达到85%以上。P1、P2、P3和P4均可抑制软骨细胞中uPA基因及蛋白的表达,但P2沉默效果最好,基因抑制率达到70%,感染后软骨细胞的增殖受到促进。结论成功构建高效靶向uPA-siRNA慢病毒载体,证实其可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因表达并促进软骨细胞增殖。
基金：
国家自然科学基金(30960387,81260453)%兵团医药卫生重点攻关项目(2013BA020)%兵团国际交流合作项目(2011BC004)
第一作者：
第一作者单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科
[2] 新疆石河子大学医学院附属医院骨科
推荐引用方式(GB/T 7714)：
史晨辉,王维山,李长俊,等.慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖[J].基础医学与临床.2014,34(05):602-609.
