目的探讨结直肠癌中肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）促进结直肠癌肿瘤细胞（CRC）对5-氟尿嘧啶（5-Fu）耐药及其机制。方法体外培养原代结直肠癌组织CAFs及普通纤维细胞（NFs）,收集肿瘤相关成纤维细胞来源上清（CAF CM）或普通纤维细胞来源上清（NF CM）与5-Fu共同处理人类结肠癌细胞株SW48,利用Hoechst33342染色观察凋亡细胞形态变化、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）双染检测肿瘤细胞早期凋亡比例的变化,细胞计数试剂盒（CCK-8）绘制毒性曲线,Western blot法检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、LC3、Beclin-1的表达水平,利用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）检测自噬在此过程中的作用。结果 Hoechst33342染色显示,肿瘤细胞5-Fu较空白对照组及5-Fu+CAF CM组凋亡细胞比例明显上升,Annexin VFITC/PI双染示,3-MA组、5-Fu组、5-Fu+CAF CM组、5-Fu+CAF CM+3-MA组凋亡百分比分别为（7.21±1.3）%、（35.4%±2. 6）%、（19.1±0.5）%、（30.4±2.1）%,Western法检测发现5-Fu+CAF CM组较5-Fu+NF CM组的LC3-B上升（1.52±0. 4）倍、beclin-1表达水平上升（1. 76±0. 3）倍,与5-Fu比较,5-Fu+CAF CM组在各时间点细胞活性均明显上升,而5-Fu+CAF CM+3-MA组与5-Fu组比,细胞活力差异无统计学意义。以上结论显示CAF CM+5-Fu组凋亡率较5-Fu组明显减少,差异有统计学意义（P=0.000）,3-MA+CAF CM+5-Fu组凋亡率较CAF CM+5-Fu组明显上升,差异有统计学意义（P=0. 008）,CAF CM+5-Fu组较NF CM+5-Fu组LC3-B、beclin-1表达增强,差异统计学意义（P=0.040、0.001）。结论肿瘤相关成纤维细胞可以减少结直肠癌对5-Fu的药物敏感性,而这一效应可能依赖保护性自噬的增强。