目的:探讨TLR2负性上游调节因子miR-548d-5p对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs）增殖和成骨分化的影响及作用机制。方法:构建TLR2过表达载体TLR2 OE。TLR2 OE和miR-548d-5p模拟物miR-548d-5p mimic分别转染hPDLSCs, RT-qPCR评估转染效率。CCK-8法和细胞克隆形成实验检测hPDLSCs增殖能力。茜素红染色和蛋白免疫印迹检测OCN蛋白表达水平，评价其成骨分化能力。蛋白免疫印迹测定TLR2/MyD88/NF-κB信号通路分子Myd88和NF-κB表达水平。结果:转染TLR2 OE可显著降低hPDLSCs细胞存活率和克隆形成数目（P＜0.05）,显著降低hPDLSCs矿化结节形成数量和OCN蛋白表达水平（P＜0.05）,同时显著增加hPDLSCs Myd88和NF-κB分子表达水平（P＜0.05）。转染miR-548d-5p mimic,可显著增加hPDLSCs细胞存活率和克隆形成数目（P＜0.05）,显著增加hPDLSCs矿化结节形成数量和OCN蛋白表达水平（P＜0.05）,同时显著降低hPDLSCs Myd88和NF-κB分子表达水平（P＜0.05）。与空白组相比，TLR2 OE和miR-548d-5p mimic共转染后，hPDLSCs存活率和克隆形成数目无显著性差异，hPDLSCs矿化结节形成数量和OCN蛋白表达水平，及Myd88和NF-κB分子表达水平均无显著性差异。结论:TLR2抑制hPDLSCs的增殖和成骨分化，miR-548d-5p则增强hPDLSCs的增殖和成骨分化。miR-548d-5p可拮抗TLR2过表达对hPDLSCs增殖和成骨分化的影响。miR-548d-5p通过TLR2/Myd88/NF-κB信号通路调节牙周膜干细胞的细胞增殖和成骨分化。