摘要：
目的 探讨生长相关蛋白43(GAP43)的表达对胶质母细胞瘤(GBM)替莫唑胺(TMZ)化疗敏感性的影响及机制.方法 根据表达GAP43的水平将S24-GBM干细胞系(S24-GBMSCs)分成3个组:sh-gap43组(敲除),对照组和gap43组(过表达).测定TMZ对离体S24-GBMSCs生物学行为的影响;将细胞移植后进行TMZ化疗,对比肿瘤体积的差异和荷瘤裸鼠的生存时间,组织学分析细胞的增殖和凋亡率,检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶信号通路的激活.组间采用t检验或单因素方差分析,生存时间采用Kaplan-Meier分析.结果 sh-gap43组细胞团经TMZ处理后36h(0.77±0.18)和 72h(0.55±0.12)后相对直径均明显小于对照组(1.45±0.11、1.64±0.19,t=12.753、18.694,P＜0.05、0.01),而 gap43 组相对直径均显著高于对照组(36 h:1.86±0.21,t=7.346,P＜0.05;72h:2.45±0.16,t=6.483,P＜0.05);体内成瘤实验中,TMZ 化疗后,sh-gap43 组(0.05±0.04)肿瘤相对体积均显著小于非化疗组(0.18±0.09,t=5.270,P＜0.01),中位生存时间(112 d)也明显长于非化疗组(103 d,x2=7.833,P＜0.05);gap43组化疗后肿瘤相对体积和中位生存时间与非化疗组比较差异无统计学意义;组织学染色显示,TMZ化疗后,sh-gap43组[(10.3±4.9)％]细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达率低于相应的非化疗组[(18.1±4.0)％,t=6.426,均P＜0.05];细胞凋亡蛋白酶(Caspase)-3的表达率[(27.4±0.4)％]显著高于相应的非化疗组[(4.0±0.1)％,t=6.389,P＜0.01];组织蛋白质印迹法(Western blot)可见,gap43组化疗后c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平(0.88±0.07)明显高于非化疗组(0.52±0.10,t=7.413,P＜0.01);而sh-gap43组化疗后JNK磷酸化水平(0.28±0.08)明显低于非化疗组(0.51±0.07,t=5.274,P＜0.05).结论 GAP43降低S24-GBM对TMZ化疗的敏感性,其机制与JNK信号通路激活有关.
