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文章类型：
单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
外科学系
胃肠外科
出处：
ISSN：
关键词：
CRISPR/Cas9
MCT1
乳酸
细胞增殖
摘要：
目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系RKO中稳定敲除MCT1基因,并检测其生物学功能。方法将CRISPRv2-MCT1-KO#1、CRISPRv2-MCT1-KO#2质粒转染至RKO细胞中,48 h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用Western blot和DNA测序技术检测MCT1基因表达情况;利用免疫荧光技术检测MCT1蛋白表达分布变化;通过乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平;通过细胞克隆形成实验以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过GSEA软件分析MCT1基因在结肠癌中可能参与的信号通路。结果 CRISPRv2-MCT1-KO质粒成功构建;Western blot和DNA测序结果显示稳定敲除MCT1基因的人结肠癌RKO细胞构建成功;与对照组相比,MCT1基因敲除细胞的细胞膜上不能观察到MCT1蛋白,且细胞内乳酸水平明显降低（P(0.01）;MCT1基因敲除后RKO细胞增殖能力明显减弱（P(0.01）;GSEA分析显示,MCT1可能通过氧化磷酸化、MYC信号通路促进结肠癌发生发展。结论通过CRISPR/Cas9技术成功构建MCT1基因稳定敲除的结肠癌RKO细胞系,可能成为研究MCT1基因在结肠癌发生发展中作用的有效工具。
基金：
国家自然科学基金青年基金资助项目（No.82003123）
第一作者：
第一作者单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
佘晓伟,孙黎,胡俊波,等.利用CRISPR/Cas9技术构建人MCT1基因敲除结肠癌RKO稳定细胞系及其生物学功能检测[J].华中科技大学学报(医学版).2022,51(01):1-6.
