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文章类型：
单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院,儿科学系,武汉,430030
华中科技大学同济医学院附属同济医院
儿科学系
出处：
ISSN：
关键词：
M122基因
诱饵栽体
酵母双杂交系统
自激活作用
小鼠巨细胞病毒
摘要：
目的 构建小鼠巨细胞病毒(MCMV)即刻早期基因M122的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-M122,并检测其自激活作用及对酵母AHl09菌株有无毒性作用,用于筛选小鼠胚胎脑cDNA文库.方法 采用反转录(RT)-PCR的方法扩增MCMV的MI22基因片段,并将其插入到pMD18-T simple vector,构建重组质粒pMD18-T-M122.用限制性内切酶EcoR I和Sal I将莺组质粒酶切鉴定,并测序.测序正确的pMD18-T-M122重组质粒和载体pGBKT7-BD分别用限制性内切酶EcoR I和sal I进行双酶切,凝胶回收M122基因片段及pGBKT7-BD载体片段.将回收的M122基因片段和pGBKT7-BD载体片段,用T4 DNA连接酶16℃连接过夜,构建诱饵质粒pGBKT7-M122.对pGBKTF-M122进行酶切鉴定,测序.将测序正确的pGBKT7-M122转化AH109酵母感受态细胞,转化菌液涂布于营养缺陷培养基SD/-Trp平板和SD/-Trp/X-α-Gal平板.空载体质粒pGBKT7-BD和阳性质粒pCL作为对照亦被转入AH109酵母感受态细胞,转化菌液分别涂布于SD/-Trp平板和SD/-Leu/X-α-Gal半板.观察平板上菌落的颜色、数量及大小.结果 1.成功构建了用于酵母双杂交筛选的诱饵载体pGBKT7-M122,其在SD/-Trp/X-α-Gal平板上的菌落为白色.2.转化有重组质粒pGSKT7-M122和空载体质粒pGBKT7的酵母菌株AH109,在2个SD/-Trp平板上长出的菌落大小一致数量相当.结论 构建的诱饵质粒pGBKT7-M122无自激活作用,对酵母菌株AH109亦无毒性.能够用于酵母双杂交系统以筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白分子.
第一作者：
第一作者单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院,儿科学系,武汉,430030
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王慧,田佳,罗丹,等.小鼠巨细胞病毒即刻早期基因M122酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用的检测[J].实用儿科临床杂志.2010,25(4):289-292.
