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◇ 统计源期刊
文章类型：
单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院,湖北,武汉,430030
华中科技大学同济医学院附属同济医院
[2]广州中医药大学附属第二医院,广东,广州,510120
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
DREAM
重组腺相关病毒
包装质粒
RNA干扰
摘要：
[目的]构建携带DREAM基因小分子干扰RNA(siRNA)的腺相关病毒载体包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,为进一步研究DREAM基因在癌痛基因治疗中的作用奠定基础.[方法]设计并合成包含DREAM短发夹序列(shRNA)两条互补的寡核昔酸链,退火后插入到经过EcoR Ⅰ和SalⅠ双酶切的pDC316-EGFP-U6质粒的EcoR Ⅰ和SalⅠ位点,得到重组质粒pDC316-EGFP-DREAMshRNA-U6,然后以其为模板,通过PCR扩增DREAMshRNA-ECFP片段,并引入EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ位点,PCR产物与pSANV2.0经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切后连接得到重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,转化入感受态大肠杆菌DH-5α,获得阳性克隆进行 PCR、酶切和测序鉴定.[结果]PCR、酶切鉴定以及测序结果证实,插入的片段序列和位点完全正确,重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP的构建成功.[结论]成功构建携带DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP.
第一作者：
第一作者单位：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院,湖北,武汉,430030
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
陈敏,项红兵,田玉科.携带DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒包装质粒pSANV2.0的构建[J].肿瘤学杂志.2011,17(01):30-33.
