目的:构建腺病毒穿梭质粒（pDC315）-肺表面活性蛋白A基因启动子（SPA）-小鼠钙激活氯通道3（mCLCA3）融合基因表达载体,分析其在气道上皮细胞系的靶向表达。方法:PCR法从PGL-SPA和pCR-Blunt Ⅱ-TOPO载体中克隆全长2 948 bp的SPA-mCLCA3基因序列并将其亚克隆入pDC315-EGFP载体,构建pDC315-SPA-mCLCA3靶向表达载体。测序鉴定正确后分别转染气道上皮细胞系（H441细胞）和非气道上皮细胞系（HEK293细胞）。每种细胞分pDC315-EGFP组（EGFP阳性,mCLCA3阴性）和pDC315-SPA-mCLCA3组（mCLCA3阳性）,分析mCLCA3在不同上皮细胞的表达水平。结果:测序结果证实成功构建含有气道上皮细胞特异性启动子SPA的mCLCA3重组质粒。靶向表达分析表明mCLCA3 mRNA在高表达SPA的H441细胞中表达显著高于其在HEK293细胞的表达（P(0.05）;免疫细胞化学表明H441细胞pDC315-SPA-mCLCA3组中mCLCA3蛋白表达阳性而pDC315-EGFP组表达阴性,HEK293细胞两种质粒转染组mCLCA3蛋白均阴性。结论:成功构建气道上皮细胞靶向表达mCLCA3基因的重组腺病毒穿梭载体pDC315-SPA-mCLCA3,为后续构建腺病毒靶向载体Ad-SPA-mCLCA3及研究mCLCA3在气道上皮缺陷中的作用提供实验基础。