摘要:
目的探讨中等剂量X射线对小鼠间充质干细胞的损伤及其机制。方法小鼠间充质干细胞株C3H10T1/2行3.5 Gy X射线照射,于照射后3、6、12、24、48和72 h及照射后1周采用Hoechst33258染色和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡。于照射后24、48和72 h及照射后1周采用SA-β-gal染色检测细胞衰老。收集照射后3、6、12、24、48、72 h及1周的细胞,采用Real-TimePCR技术检测Fas及其配体FasL、p53及其下游组分p21WAF1mRNA水平的表达。采用免疫荧光法检测照射后6、12和24 h细胞Fas蛋白的表达。结果照射后3 h细胞凋亡率开始增加11.72%±1.61%(t=9.01,P(0.01),至12 h达高峰20.52%±1.96%(t=16.27,P(0.01),48 h已基本恢复正常4.93%±0.46%(t=2.26,P)0.05)。照射后72 h细胞SA-β-gal阳性率为53.33%±5.62%,较正常组3.24%±0.39%明显升高(t=17.77,P(0.01),即照射后72 h出现细胞衰老高峰。Fas、FasL mRNA在照射后3 h开始增高,12 h达到高峰,1周后恢复正常。Fas蛋白在照射后12 h达到高峰。Fas、FasL mRNA及Fas蛋白的表达高峰时相与细胞的凋亡高峰时相一致。p53、p21WAF1mRNA在照射后12 h短暂升高,72 h出现大幅度升高,p53、p21WAF1mRNA的双峰分别与细胞的凋亡高峰和衰老高峰相吻合,且两者在细胞衰老时相的表达均明显高于在细胞凋亡时相的表达(t=17.85、13.26,P(0.01)。结论小鼠间充质干细胞C3H10T1/2对中剂量Χ射线较敏感,照射后出现了早期凋亡晚期衰老的损伤规律,Fas/FasL通路和p53/p21WAF1通路参与了中剂量Χ射线照射后小鼠间充质干细胞C3H10T1/2的损伤过程。