摘要：
目的观察siRNA干扰质粒转入铜绿假单胞菌后,MexB蛋白表达量的变化。方法针对mexB基因设计合成特异性siRNA分子,与pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建pGPU6/GFP/NeosiRNA重组质粒。构建重组表达质粒pET22b+/mexB,并转化大肠杆菌BL21（DE3）plysS,诱导表达MexB蛋白,蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。siRNA质粒分别电转化铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株,运用Western blot观察转化8、12、24 h后MexB蛋白表达量的变化。结果成功构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重组质粒。成功表达铜绿假单胞菌外排泵蛋白MexB,并制备多克隆兔抗。siRNA质粒对铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株的mexB基因均具有良好的沉默效果,而且沉默效果存存时间差异性。结论 siRNA质粒转化3株铜绿假单胞菌后,在8 h及12 h时均可观察到MexB蛋白表达量明显减少,而在24 h时MexB蛋白表达量无改变。
