目的:建立梯度高效液相色谱法测定苯酰甲硝唑有关物质的方法。方法:采用梯度洗脱方法。色谱柱为Phen-omsil C18（250mm×4.6mm,5μm）;流动相A为磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.5g,加水溶解并稀释至1 000mL,用磷酸调节pH至3.2）,流动相B为乙腈,以0.9mL.min-1流速进行梯度洗脱,梯度洗脱条件:05min,A为76%;515min,A从76%→65%;1560min,A为65%;6060.1min,A从65%→76%;60.175min,A为76%;检测波长为232nm;柱温40℃;进样量10μL。照杂质对照品对照法和不加校正因子的主成分自身对照法检查。结果:杂质2-甲基-5-硝基咪唑、甲硝唑、苯甲酸均能达到很好的分离,并分别在0.25165.032mg.L-1（r=0.999 9）,0.24564.912mg.L-1（r=1.000 0）,0.066 81.336mg.L-1（r=0.999 9）范围内具有良好的线性关系。2-甲基-5-硝基咪唑、甲硝唑、苯甲酸的平均回收率（n=9）分别为97.93%（RSD为1.03%）,97.63%（RSD为0.46%）,98.01%（RSD为1.01%）。结论:本方法灵敏快速、准确可靠,可作为苯酰甲硝唑的有关物质检查方法。