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人外周血单核细胞3种不同转染方法的比较

Comparison of Transfection Efficiency of Monocytes from Human Peripheral Blood by Three Different Methods

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收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-C

单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
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关键词: 外周血 单核细胞 腺病毒 慢病毒 基因转染

摘要:
目的采用3种不同方法转染原代人外周血单核细胞,以寻找一种简便、高效的单核细胞转染方法。方法采用人淋巴细胞分离液从健康人外周血中分离出单个核细胞,锥虫蓝拒染法检测细胞存活率。单个核细胞在孔板内培养2 h后吸弃悬浮的淋巴细胞,获得贴壁的单核细胞。分别采用Lipofectamine 2000介导载体质粒(PEGF-N1),慢病毒(NC-GFP-LV)及腺病毒(Adv-GFP)3种方法转染单核细胞,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,并收集细胞上流式细胞仪检测GFP阳性细胞的比例。结果通过人淋巴细胞分离液分离的单个核细胞的活细胞率)95%,获得的单核细胞数量多,贴壁牢,形态均一。转染48 h后,Lipofectamine 2000介导载体质粒及慢病毒转染的单核细胞无绿色荧光,流式细胞仪检测GFP阳性细胞均(1%,腺病毒转染的单核细胞可见较强绿色荧光,GFP阳性细胞约占10%。结论腺病毒,而不是Lipofectamine 2000或慢病毒,能有效地将外源基因导入单核细胞内表达。

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第一作者:
第一作者单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
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