摘要:
目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1(Blimp1)-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞(DC)诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb/c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8 d培养体系中,于培养第2天用慢病毒载体将Blimp1-短发夹RNA转染入细胞中。实验分为3组:空白对照组培养体系中不加入任何慢病毒载体,空载体对照组培养体系中进行空载体慢病毒干预,实验组培养体系中进行lenti-Blimp1-短发夹RNA干预。转染1周内观察转染效率,观察细胞的形态变化,记录细胞的生长曲线;于培养第4、5天收集细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组Blimp1信使RNA和Blimp1的表达情况;检测培养第8天CD1 1c+、CD86+及主要组织相容性复合物Ⅱ(MHC-Ⅱ)+细胞的百分率。结果病毒转染后第3天细胞出现荧光,其后荧光持续存在;培养过程中出现典型DC形态,接受病毒转染的细胞有形态受损表现。空白对照组细胞在培养的前3 d内呈对数增长,第4天细胞数目达到峰值,为(2.45±0.26)×106/孔,第8天为(2.27±0.19)×106/孔;空载体对照组和实验组细胞在病毒侵染后细胞增殖停滞,细胞数目稳定在(1.69±0.39)×106/孔。空载体对照组和实验组细胞中Blimp1信使RNA及Blimp1蛋白的表达量分别为空白对照组的76%和1%以及105%和74%。在空白对照组、空载体对照组和实验组中CD11c+细胞分别占(69.2±5.0)%、(68.6±5.9)%和(72.8±5.5)%(P)0.05);CD86+细胞分别占(51.1±4.9)%、(49.5±4.3)%和(50.2±6.0)%(P)0.05);MHC-Ⅱ+细胞分别占(56.3±7.3)%、(69.4±4.5)%和(46.5±5.7)%,3组间的差异有统计学意义(P(0.05)。结论慢病毒介导的短发夹RNA基因治疗是调控骨髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段;Blimp1基因的下调不影响DC前体细胞的定向分化,但能够抑制DC的成熟。