目的探讨表观遗传学药物对2D和3D胆管癌系统性药效毒理学研究。方法采用将单层培养的TFK 1细胞接种于2%poly-HEMA 100μl包被的U型底-96孔板中制备TFK-1 3D肿瘤细胞球。采用WST法和FDA/PI荧光染色法检测表观遗传学药物作用后2D和3D胆管癌肿瘤模型中肿瘤细胞的存活率。采用甲基化特异性PCR检测药物作用前后APC、E-Cadherin和p16INK4A基因甲基化程度的改变。结果 3D培养方法能形成外观圆形内部紧密的肿瘤小球,球体的平均直径为350～400μm。TFK-1胆管癌细胞3D模型比2D模型对药物治疗抵抗更明显。与2D肿瘤模型相比,高剂量的药物才能逆转3D模型中肿瘤细胞的高甲基化状态,但是2D模型表现的剂量相关的去甲基化特点在3D模型中并末出现。结论实验成功建立胆管癌上皮细胞3D模型。立体的3D肿瘤模型比单细胞层的2D模型生物学特点更为复杂,该特点能影响表观遗传学药物的药效。实验证实,3D人胆管上皮细胞模型可作为表观遗传学药物治疗胆管癌研究中的一种有效可靠的模型。