摘要:
目的在细胞水平研究腺苷对原代培养的SD大鼠海马神经元内钙离子振荡的具体影响,并探讨其可能的作用机制,从而为腺苷的抗癫痫作用提供实验依据。方法本实验以SD大鼠新生48h内的乳鼠作为取材对象,以胰酶消化加巴氏管机械吹打的方法 ,经条件培养基纯化建立原代培养海马神经元的研究模型。选取7~9d的细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM标记技术,利用细胞外灌流方式给予腺苷的方法 ,检测腺苷干预前后钙离子振荡的相关指标。结果原代培养的SD大鼠乳鼠的海马神经元在7~9d发育基本成熟后可以观察到神经元内自发同步的钙离子振荡。给予腺苷后,发现Ade能抑制成熟海马神经元自发同步钙离子振荡的频率和幅度:频率从加药前的(0.020±0.003)Hz减少到(0.005±0.001)Hz,幅度从加药前的1.87±0.17下降到1.10±0.07,且这种抑制作用对于腺苷的浓度水平有一定的要求性。用高钾作为去极化刺激模拟癫痫状电活动时,钙离子震荡的频率加快,幅度增大,而腺苷对高钾诱发钙离子振荡的频率和幅度表现出了显著抑制作用。结论在体外培养海马神经元的研究中发现,腺苷对海马神经元内钙离子振荡具有显著的抑制作用,这可能是腺苷作为内源性物质发挥抗癫痫作用的机制之一。