摘要:
目的 研究胶质细胞内丝蛋白水解酶Cathepsin S(CS)对小鼠面神经损伤后神经再生的影响.方法 将CS基因敲除(CS-/-)小鼠和野生型小鼠的一侧的面神经在茎乳孔处离断,术后2、4、7、14、30、50 d取出含面神经核(FM)的脑干进行切片,以Iba-1、Tenasin-R(TNR)、chAT抗体分别染色胶质细胞和面神经元并计数.以CS、CystanC (CysC)、Iba-1或者F4/80抗体结合反应进行胶质细胞免疫荧光双重染色.术后7d,取两组合FMN的脑干,用HBG标记的CS、CysC和TNR抗体作Westernblot分析.术后7d取两组含FMN的脑干,用QuickprepmRNA套装进行CS、CysC的RT-PCR定量分析.结果 面神经离断后7d,野生型胶质细胞包绕神经元,但CS-/-胶质细胞仅仅接触而不包绕神经元.免染结果提示,CS出现在野生型胶质细胞,而极少出现在CS-/-胶质细胞,CysC在两组均增加,同时,CS-/-胶质细胞对TNR的降解能力显著低于野生型胶质细胞.RT-PCR和Westemblot分析显示,神经离断后,CS在野生型FMN内明显增加,但CysC在两组中均增加.TNR在野生型FMN内明显减少.对chAT染色的面神经元统计显示,术后50 d,CS缺失造成了神经元存活率降低,与野生型有显著性差异.结论 面神经离断后,CS的缺失会使神经元容易死亡,CS在激活的胶质细胞内的表达对损伤的神经元的保护及恢复起到重要作用.