目的研究人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）16型的E6病毒癌基因被特异性靶向HPV16-E6位点成簇的、规律间隔的短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）定点敲除后,宫颈癌细胞系SiHa在细胞凋亡和增殖方面的变化。方法设计靶向HPV16E6基因的向导RNA（guide RNA,gRNA）,脂质体介导gRNA质粒和Cas9质粒对HPV16阳性人宫颈癌细胞系SiHa和HPV16阴性的正常人胚肾上皮HEK293细胞转染。流式细胞术检测SiHa和HEK293细胞转染前后细胞在凋亡率方面的变化;CCK8法检测转染前后两种细胞的增殖能力变化;蛋白质印迹法检测E6基因敲除后,SiHa细胞中E6蛋白和p53蛋白的表达水平。结果将靶向HPV16E6基因的gRNA质粒和Cas9质粒共同转染SiHa细胞48h后,E6-gRNA/Cas9组SiHa细胞凋亡率为25.6%,与未转染gRNA和Cas9质粒的SiHa细胞空白组（2%）以及只转染等量Cas9质粒的Cas9组（3%）相比明显上升,差异有统计学意义,F=58.500,P(0.001;而只转染等量Cas9质粒的Cas9组和空白组SiHa细胞的凋亡率差异无统计学意义,P)0.05。CCK8实验表明,转染72h后,与空白组相比,E6-gRNA/Cas9组SiHa细胞增殖抑制率为31.3%,细胞增殖抑制明显,P=0.008;转染96h后,与空白组相比,E6-gRNA/Cas9组细胞增殖抑制率为30.6%,P=0.002;而不表达HPV16E6基因的HEK293细胞的增殖能力未被抑制,3组细胞之间增殖能力相比差异无统计学意义,F=0.219,P=0.810。转染48h后,与空白组相比,SiHa细胞E6蛋白表达下降,E6蛋白表达抑制率为-45.24%,三组之间E6蛋白表达量差异有统计学意义,F=30.392,P(0.001;与空白组相比,p53蛋白表达上调+250.08%,3组p53蛋白表达量差异有统计学意义,F=50.530,P(0.001。结论应用CRISPR特异性地抑制HPV16E6基因表达可以诱导SiHa细胞凋亡,抑制SiHa细胞增殖,下调E6蛋白并且上调p53蛋白表达。