目的:探索Toll样受体（Toll like receptor,TLR）-4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制。方法:Percoll密度梯度离心法分离原代大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,流式细胞术鉴定细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90。用Transwell小室建立干细胞（上室）-成骨细胞（下室）共培养体系,在此体系下对BMSCs进行破骨细胞诱导培养。将共培养体系分为TLR-4激活组和空白组,前者以TLR-4激动剂LPS（10 ng/m L）激活,后者加入等体积PBS。在诱导培养第6天,对上室细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色,计数并比较各组破骨细胞数。同时,蛋白质印迹检测各组下室细胞悬液中核因子κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）的蛋白表达,观察电泳条带并行定量分析。结果:密度离心法获得原代大鼠BMSCs,流式细胞分析检测显示CD34阴性、CD44、CD54和CD90阳性。TRAP染色阳性细胞为破骨细胞,细胞计数显示,TLR-4激活组破骨细胞数明显多于空白组（t=13.556,P(0.05）。蛋白质印迹结果显示,TLR-4激活组RANKL的表达明显多于空白组（t=17.630,P(0.05）。结论:在成骨细胞共培养体系下,激活TLR-4能够促进BMSCs向破骨细胞分化,其机制可能与TLR-4促进成骨细胞分泌RANKL有关。