目的探索人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,i PSCs）的无饲养层培养方法,并对此方法培养的i PSCs进行鉴定。方法将人i PSCs接种于玻璃粘连蛋白（Vitronectin XF）包被的培养皿上培养,采用EDTA消化传代。倒置显微镜下观察i PSCs的生长状态;碱性磷酸酶（ALP）染色鉴定;采用PCR和免疫荧光检测i PSCs多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2的表达情况。结果倒置显微镜下可见i PSCs呈典型的克隆状生长,克隆呈圆形或椭圆形,边界清晰、整齐;ALP染色结果阳性;PCR结果显示人i PSCs强表达多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2;免疫荧光结果显示多能干细胞特异性指标SSEA-1、Nanog、Sox2均呈阳性。结论无饲养层培养体系培养人i PSCs,细胞能稳定增殖,保持自我更新潜能及多能性。