摘要:
目的 探讨结直肠肿瘤中微小RNA(miRNA,miR)-29b对Tribbles假激酶2(TRIB2)调节的机制。方法 利用网上在线数据库分析潜在结合TRIB2的3’端非编码区(3’UTR)的miRNA,选取其中评分最高的miR-29b进行研究;利用真核细胞转染技术,干扰结直肠肿瘤细胞中miR-29b的表达;蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞中TRIB2的蛋白及mRNA表达差异;利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-29b结合在TRIB2-3’UTR上的具体位置;β-半乳糖苷酶染色法检测miR-29b对结直肠肿瘤细胞衰老的影响。统计学分析均应用SPSS 24.0软件进行,两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析。结果 在结肠癌细胞株中过表达miR-29b后,与对照组比较,TRIB2的mRNA水平下降至(63.468±4.154)%和(43.145±7.523)%(t=5.351,P(0.01和t=6.074,P(0.01);转入针对miR-29b的inhibitor后,TRIB2的mRNA水平则升高至(205.033±27.070)%和(233.353±18.649)%(t=4.663,P(0.01和t=9.411,P(0.01)。与上述结果一致,转入miR-29b则抑制,inhibitor则上调TRIB2的蛋白水平。而在结肠癌细胞中过表达miR-29b后,野生型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性分别下降至(53.531±3.787)%和(45.051±1.728)%(t=6.928,P(0.01和t=15.570,P(0.01),而突变型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性只有轻微下降[下降至(87.366±3.825)%和(92.839±3.171)%,t=5.578,P(0.01和t=2.245,P)0.05]。过表达miR-29b后,结肠癌细胞中衰老的细胞比例从41.473%升高至62.085%(χ2=19.731,P(0.01),同时过表达TRIB2后,则下降至46.866%(χ2=12.031,P(0.01)。结论 miR-29b可靶向调控TRIB2的表达,促进结直肠肿瘤的衰老。