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微小RNA-29b通过靶向调节Tribbles假激酶2的表达促进结直肠肿瘤的衰老

MicroRNA-29b promotes cellular senescence of colorectal tumors by targeting tribbles pseudokinase 2

文献详情

资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-E ◇ 中华系列

单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心 [2]中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室肿瘤医学协同创新中心结直肠外科华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心 [3]华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系 [4]华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤中心
出处:
ISSN:

关键词: 微小RNA-29b Tribbles假激酶2 结直肠癌 细胞衰老

摘要:
目的 探讨结直肠肿瘤中微小RNA(miRNA,miR)-29b对Tribbles假激酶2(TRIB2)调节的机制。方法 利用网上在线数据库分析潜在结合TRIB2的3’端非编码区(3’UTR)的miRNA,选取其中评分最高的miR-29b进行研究;利用真核细胞转染技术,干扰结直肠肿瘤细胞中miR-29b的表达;蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞中TRIB2的蛋白及mRNA表达差异;利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-29b结合在TRIB2-3’UTR上的具体位置;β-半乳糖苷酶染色法检测miR-29b对结直肠肿瘤细胞衰老的影响。统计学分析均应用SPSS 24.0软件进行,两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析。结果 在结肠癌细胞株中过表达miR-29b后,与对照组比较,TRIB2的mRNA水平下降至(63.468±4.154)%和(43.145±7.523)%(t=5.351,P(0.01和t=6.074,P(0.01);转入针对miR-29b的inhibitor后,TRIB2的mRNA水平则升高至(205.033±27.070)%和(233.353±18.649)%(t=4.663,P(0.01和t=9.411,P(0.01)。与上述结果一致,转入miR-29b则抑制,inhibitor则上调TRIB2的蛋白水平。而在结肠癌细胞中过表达miR-29b后,野生型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性分别下降至(53.531±3.787)%和(45.051±1.728)%(t=6.928,P(0.01和t=15.570,P(0.01),而突变型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性只有轻微下降[下降至(87.366±3.825)%和(92.839±3.171)%,t=5.578,P(0.01和t=2.245,P)0.05]。过表达miR-29b后,结肠癌细胞中衰老的细胞比例从41.473%升高至62.085%(χ2=19.731,P(0.01),同时过表达TRIB2后,则下降至46.866%(χ2=12.031,P(0.01)。结论 miR-29b可靶向调控TRIB2的表达,促进结直肠肿瘤的衰老。

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