摘要：
目的 探讨雄激素受体(AR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中促进肺癌细胞A549及H1533细胞侵袭的具体机制.方法 通过在A549及H1533细胞中过表达或敲低AR,采用Transwell方法观察AR对A549及H1533细胞侵袭的影响;筛查NSCLC中与侵袭密切相关的基因,寻找可以被AR调控的下游基因,采用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)来验证该靶基因与AR的调控关系,采用Transwell方法来验证其对细胞侵袭的影响;通过生信分析寻找靶基因跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)的调控微小RNA(miRNA),采用qPCR和Western blot方法来验证该miRNA与TMPRSS2的调控关系,采用Transwell方法来验证其对细胞侵袭的影响;最后通过裸鼠在体成瘤实验观察上述基因对肿瘤细胞侵袭的影响,并采用t检验比较各组间差异.结果 过表达 AR 增加了肺癌细胞(H1355-oeAR 和 A549-oeAR)的侵袭(0.75±0.08 比 1.84±0.25、0.54± 0.04 比 1.39±0.30,t=36.360、5.362,P＜0.05),敲低 AR 降低了肺癌细胞的侵袭(A549-shAR)(0.83±0.08 比 0.22±0.03、0.61±0.07 比 1.90±0.29,t=45.178,P＜0.01).采用生信分析预测及 qPCR验证发现 TMPRSS2 表达受 AR 调控(0.55±0.04 比 1.67±0.37、0.46±0.04 比 1.67± 0.29,t=23.152、43.228,P＜0.01).H1355-oeAR 和 A549-oeAR 组 TMPRSS2 的表达(0.29±0.04 比1.28±0.18、0.32±0.03 比 1.16±0.15,t=7.152、4.298,P＜0.05)显著高于对照组.敲低TMPRSS2 部分降低 H1355-oeAR 和 A549-oeAR 组细胞侵袭(0.78±0.05 比 0.25±0.01、0.82±0.06 比0.36±0.01,t=6.358、14.298,P＜0.05),敲低 TMPRSS2 还可部分降低 H1355-oeAR 和 A549-oeAR 中AR 水平(2.25±0.44 比 1.10±0.14、2.32±0.53 比 1.15±0.23,t=8.258、12.538,P＜0.05);通过生信分析及验证实验发现let-7c-5p可以抑制TMPRSS2表达(1.27±0.11比0.48±0.08、1.35± 0.33比0.56±0.08,t=47.110,P＜0.01),过表达let-7c-5p可以部分逆转过表达AR所致的H1355和 A549 细胞的侵袭(1.77±0.34 比 0.94±0.10、2.35±0.33 比 1.10±0.11,t=33.116、21.108,P＜0.01).也可以降低过表达AR所致的TMPRSS2蛋白表达(1.09±0.13比0.55±0.08、1.36± 0.21 比 0.76±0.10,t=3.760、10.105,P＜0.05);ChIP 结果表明,let-7c-5p 可以与 H1355 和 A549 细胞中 TMPRSS2 3'启动子区域的 AREs 结合(0.23±0.02 比 1.32±0.20、0.34±0.03 比 1.10± 0.10,t=7.110、5.175,P＜0.05),双荧光素酶检测结果显示,let-7c-5p可以抑制野生型TMPRSS23'端非编码区(3'UTR)结构的荧光素酶表达,而不能抑制突变型TMPRSS2 3'UTR结构的荧光素酶表达(1.25±0.14 比 0.44±0.03、0.58±0.03 比 0.66±0.08,t=12.510,P＜0.05;t=1.175,P＞0.05);通过IVIS对裸鼠肿瘤进行评估,发现oeAR+luc组比Ctrl+luc组发生更多的肿瘤细胞侵袭(0.33±0.04 比 0.78±0.08,t=7.566,P＜0.05),而 oeAR+shTMPRSS2+luc 组较 oeAR+luc 组侵袭降低(0.19±0.04 比 0.78±0.18,t=8.56,P＜0.05).结论 AR 可以通过改变 let-7c-5p/TMPRSS2信号通路来促进肺癌细胞A549及H1533侵袭.
