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小鼠附睾小体特异性mrna传递入n2a和tm4细胞的研究

Delivery of epididymis-specific mRNAs from mouse epididymosomes into N2a and TM4 cells

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资源类型:
Pubmed体系:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-C

单位: [1]武汉市第一医院妇产科 [2]华中科技大学同济医学院生殖健康研究所 [3]武汉华科生殖专科医院 [4]华中科技大学同济医院生殖医学中心
出处:

关键词: 附睾小体 Adam7 Crispl 细胞间通讯

摘要:
目的:研究小鼠附睾小体特异性mRNA能否递入Neuro-2a(N2a)及TM4细胞中,为探讨附睾小体mRNA功能提供实验依据。方法:通过RT-PCR检测附睾特异性基因(Adam7、Crisp1、Defb22、Wfdc2、Wfdc9)在成年雄性BALB/c小鼠睾丸、附睾、附睾小体和精子中,以及在人睾丸、精浆小体和精子中的存在情况。通过低速离心、过滤、超速离心方法分离BALB/c小鼠附睾小体,通过PKH26进行荧光标记,与饥饿培养24 h的N2a和TM4细胞共孵育1 h,分别以未标记PKH26的附睾小体组、无附睾小体的加PKH26染料组、未加附睾小体和PKH26染料阴性组作为对照,观察附睾小体是否与N2a和TM4细胞融合并被摄取。通过RT-PCR对共孵育1 h后N2a和TM4细胞进行附睾特异性基因的检测。结果:Adam7和Crisp1在小鼠附睾、附睾小体和精子中存在,睾丸中无表达,在人精浆小体和精子中存在,睾丸中无表达。PKH26和hoechst33258荧光双标结果显示小鼠附睾小体与N2a和TM4细胞融合并被摄取,RT-PCR结果表明共孵育1 h后N2a和TM4细胞可以检测到Adam7和Crisp1基因的mRNA。Western印迹结果显示与附睾小体孵育后的N2a和TM4细胞可以检测到CRISP1蛋白。结论:附睾小体可传递附睾特异性mRNA Adam7和Crisp1进入到细胞中,其中Crisp1可能被翻译成蛋白,其功能和意义有待进一步研究。

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第一作者单位: [1]武汉市第一医院妇产科
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