摘要：
目的:探究p53介导的铁死亡在调控人结直肠癌顺铂耐药中的作用及机制.方法:采用人结肠腺癌细胞株LOVO反复短期暴露于顺铂并逐渐增加顺铂浓度的方法建立耐顺铂细胞株LOVO/DDP.顺铂单独及联合铁死亡激活剂erastin/铁死亡抑制剂liproxstatin-1处理LOVO和LOVO/DDP细胞.CCK-8法测定不同处理组的细胞活力,计算顺铂的IC50值;RT-qPCR检测铁死亡相关基因的mRNA表达水平;采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)绿色荧光探针2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)、线粒体红色荧光探针MitoTracker Red CMXRos及线粒体JC-1检测试剂盒测定不同处理组中细胞内ROS和线粒体功能;采用亚铁离子荧光探针FerrOrange检测细胞内亚铁离子含量;Western blot检测不同处理组中溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)重组蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和p53的蛋白表达水平.结果:顺铂单独处理后,LOVO/DDP细胞活力较LOVO细胞下降平缓,ROS增加和线粒体损伤不显著,促进铁死亡的基因低表达,抑制铁死亡的基因高表达,SLC7A11和GPX4的蛋白表达略下降,p53表达显著升高(P＜0.05);联合铁死亡激活剂剂erastin组LOVO/DDP细胞活力较LOVO细胞显著下降,ROS和亚铁离子水平显著增加,诱导线粒体功能障碍,SLC7A11和GPX4的表达显著下降,p53的表达显著增加(P＜0.05);联合铁死亡抑制剂liproxstatin-1可逆转上述结果.结论:p53介导的铁死亡可增强结直肠癌细胞对顺铂的敏感性.
