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华中科技大学同济医学院附属同济医院
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摘要：
本发明涉及属于角膜解剖技术领域，具体公开了一种三维打印技术在角膜缘组织体外三维建模中的应用，该应用的方法通过标本固定、组织包埋及切片、HE染色、图像采集、数字化和三维重建得到角膜缘组织的三维结构数字化模型。本发明重建的角膜缘三维立体图能够显示人角膜缘组织的显微结构，从而表明本发明采集切片染色后高清显微组织图像，进行三维数字重建的方法是具体可行的。本发明方法结合了低倍镜下相邻组织图像容易对位和高倍镜下的组织图像更加清晰的优点，并且简单实用，也可用于其它组织的显微结构三维重建。
主权项：
1.一种基于三维打印技术体外建立角膜缘组织的三维结构数字化模型的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)标本固定选取完整保留角膜及角膜缘组织的标本，将标本置于固定液中固定；2)组织包埋及切片a.将标本用滤纸包裹好后，首先将标本依次放入体积分数为75％、85％、95％和100％的乙醇中各脱水4h，然后浸入二甲苯I中，再浸入二甲苯II中直至透明；b.将标本放入电烤炉的液体蜡I中透蜡，再在液体蜡II中透蜡；将标本取出放入包埋框中，待蜡油固定后放入水中冷却成形，修整蜡块，以垂直于角膜做连续切片，将裱好的切片置于染色架上并依次编号；其中，切片的数量为80～200片，切片厚度为3～6μm；3)HE染色a.以每间隔2张的顺序选取编号为1、4、7、10、14……的切片，放入烤箱中烘烤；b.将上述所有切片依次放入二甲苯I和二甲苯II液中浸泡，然后：将切片依次放入体积分数为100％、95％和85％的乙醇中各1分钟浸泡，再用水冲洗；c.首先将切片浸入苏木素染液中，水冲洗；然后浸入盐酸乙醇中，水冲洗；再氨水返蓝，水冲洗；浸入伊红溶液中，水冲洗；d.首先将将切片依次放入体积分数为75％、85％、95％和100％的乙醇中各脱水1～2min，然后依次放入二甲苯I和二甲苯II中透明化，再中性树胶封固切片标本并按序号依次排列；4)图像采集、数字化和三维重建a.光学显微镜下观察HE染色后的角膜缘结构，通过40倍视野找到角膜缘，利用相关照相软件采集每张切片的原图并依次编号；b.将光学显微镜转换成200倍视野，重新采集每张切片的角膜缘组织图像并依次编号；由于高倍镜下无法采集角膜缘组织的完整显微照片，只需保证每张照片上有角膜缘的上皮细胞层及下方的部分基质层；c.通过Adobe PhotoShop软件将40倍视野照片放大5倍作为比照，在同一切片的200倍视野照片上的相同部位画上三角形；d.以上述三角形作为定位标准轴，将所有200倍视野照片旋转对齐后重新裁剪，并以tiff文件格式保存，保证所有照片的三角都在同一位置；e.按顺序将裁剪后的图片导入Unigraphics NX软件，将每张图片上的上皮细胞层和基质层的边界描绘出来，选择重建的层厚，以此层厚将保存的草图进行等间距分开，通过Unigraphics NX将草图按照顺序进行三维重建，得到角膜缘组织的三维结构数字化模型。
