资源类型：
申请人：
华中科技大学同济医学院附属同济医院
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武汉复衡生物医学技术开发有限公司
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当前专利权人：
华中科技大学同济医学院附属同济医院
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武汉复衡生物医学技术开发有限公司
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申请号：
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法律状态：
主分类号：
摘要：
本发明提供了一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，分离来源丰富的人外周血 CD4 + T细胞，经过能符合临床药品生产质量管理规范(GMP)的简便诱导方法，在短期内将CD4 + CD25 ‑ T细胞诱导并扩增成为高纯度、高调节效率的CD4 + CD25 + CD127 dim 的抗原非特异性调节性T细胞。经过一个周期(6～7天)的诱导培养，即可获得足够治疗剂量的Treg，诱导的Treg表型和调节功能稳定，而且极大降低了由于长期体外培养可能出现的细胞活力减弱、微生物污染等事件的发生率，且质控方法特异快速，非常适合于临床应用。
主权项：
一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤包括：S1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞PBMC；S2、去除非CD4 + T细胞，再去除CD25 + T细胞，从而得到CD4 + CD25 ‑ CD45RA + T细胞；S3、将CD4 + CD25 ‑ CD45RA + T细胞重悬于含5～10％AB型人血清或自体血清的AMI‑V CTS培养基，计数细胞总量，加入1～4倍细胞数量的抗CD3/CD28磁珠或抗CD3/CD28抗体、和终浓度为500～2000U/ml的rhIL‑2，刺激培养6～12天诱导结束，培养过程中每2～3天补加一次rhIL‑2；S4、计数获得的活细胞量，取部分诱导后的T细胞进行表型和纯度的鉴定；S5、将剩余诱导后的T细胞重悬于含5～10％人血清的AMI‑V CTS培养基，加入终浓度为50～300U/ml的rhIL‑2，培养1～2天以静息诱导后的T细胞；分选活细胞后，取部分细胞进行混合淋巴细胞培养，其余细胞用含人血清白蛋白的生理盐水重悬。
