摘要:
目的:比较单层贴壁培养法和拟胚体(EB)悬浮培养法诱导人多潜能干细胞分化为大脑基底内侧神经节隆起区(MGE)神经前体细胞分化的效率,并探讨不同浓度的SHH通路激动剂SAG对分化为MGE神经前体细胞纯度的影响,为细胞移植治疗探索优化的分化方案。方法:分别采用单层贴壁诱导法和EB悬浮法诱导人多潜能干细胞分化为神经上皮细胞,通过加入不同浓度的SAG使其腹侧化,最终诱导成表达NKX2.1的MGE前体细胞并进行计数。比较2种不同的分化方案和不同浓度的SAG对MGE神经前体细胞纯度的影响。结果:在单层贴壁诱导法中,当SAG浓度为0μM、0.1μM、0.5μM、1μM、2μM和3μM时,NKX2.1阳性细胞率分别为0%、(48.3±11.5)%、(78.6±2.7)%、(77.6±4.0)%、(69.0±7.5)%和(67.7±7.9)%;SAG浓度为0.5μM和1μM时诱导分化获得的MGE神经前体细胞纯度显著高于其他浓度组(P(0.001或0.05)。当SAG浓度为0.5μM时,在EB悬浮培养法中NKX2.1的阳性细胞率为(74.8±6.5)%,与单层贴壁诱导法差异无统计学意义(P)0.05)。采用单层贴壁诱导法时,神经球和神经元出现的时间点均要早于采用EB悬浮培养法。结论:采用单层贴壁诱导法,0.5μM的SAG可能是人多潜能干细胞分化培养为MGE神经前体细胞的更优化方案。